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          多糖涂敷型手性柱(反相流動相)沖洗方法

          更新時間:2022-11-11點擊次數:2371

          當手性色譜柱分離度下降、

          柱壓過高等色譜柱異常現象發生時,

          才需要使用本方法沖洗

          以下沖洗步驟及流動相體系僅適用于大賽璐多糖涂敷型反相手性柱AD-RH/AD-3R,AS-RH/AS-3R,AY-RH/AY-3R,AZ-RH/AZ-3R,OD-R/OD-RH/OD-3R,OJ-RH/OJ-3R,OX-RH/OX-3R,OZ-RH/OZ-3R,流速僅適用于3/5/10µm, 4.6*150/250mm規格,對于其他規格的手性柱,其沖洗時所用的流速請根據各自所能耐受柱壓不同另行調整。


          1、一般情況下,使用常規方法沖洗色譜柱;若常規方法無效,則使用特殊方法一沖洗色譜柱;若特殊方法一無效,則使用特殊方法二沖洗色譜柱。

          2、沖洗過程中,10µm柱柱壓請勿超過3Mpa,5µm柱柱壓請勿超過6Mpa,3µm柱柱壓請勿超過15Mpa。

          3、以下沖洗過程中涉及的流速僅供參考,實際操作中以柱壓不超過以上說明為宜。

          4、以下沖洗過程中提到的20倍柱體積,以4.6*150mm規格柱為例,約為30mL。



          沖洗方法

          常規方法:

          1、用水/甲醇或水/乙腈(80/20,v/v或85/15,v/v),流速0.5ml/min,沖洗20倍柱體積;

          2、沖洗結束,驗柱或重復以前的樣品實驗,看是否柱效有提高。

          特殊方法一:

          1、 用水/甲醇(90/10,v/v),流速0.5 ml/min,沖洗20倍柱體積;

          2、逐漸提高甲醇的比例到100%,然后以甲醇100%,0.3ml/min左右的流速,沖洗20倍柱體積;

          3、逐漸增加水的比例至90%,即水/甲醇(90/10,v/v);

          4、沖洗結束,驗柱或重復以前的樣品實驗,看是否柱效有提高。

          特殊方法二:

          1、用水/甲醇(90/10,v/v),流速0.5 ml/min,沖洗20倍柱體積;

          2、逐漸提高甲醇的比例到100%,然后以甲醇100%,0.3ml/min左右的流速,沖洗20倍柱體積;

          3、再用酸性流動相,甲醇/三氟·乙酸(100/0.1,v/v),0.3ml/min的流速,沖洗20倍柱體積;

          4、再用中性流動相甲醇過渡,甲醇100%,0.3ml/min的流速,沖洗20倍柱體積;

          5、逐漸增加水的比例到90%,即水/甲醇(90/10,v/v);

          6、沖洗結束,驗柱或重復之前的樣品實驗,看是否有提高柱效。





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