如何正確清洗 HPLC 色譜柱

高效液相色譜柱

液相色譜柱分為三種基本類型：液-液、液-固和離子交換。液-液柱不太受歡迎，因?yàn)樗鼈兊姆€(wěn)定性有限且使用不便。在液固柱中，固定相是固體，分析物被吸收到固定相中，從而分析混合物的組成。通常，HPLC 之前裝有保護(hù)柱，以保護(hù)和延長(zhǎng)分析柱的使用壽命。保護(hù)柱的作用是去除柱中不可逆的顆粒、污染物、分子等。您還可以選擇C18 堿性 HPLC 色譜柱、苯醚 HPLC 色譜柱、C8/C18 標(biāo)準(zhǔn) HPLC 色譜柱和其他 HPLC 色譜柱使用。

常用的 HPLC 色譜柱由不銹鋼制成，但也可以由厚玻璃、聚合物（如聚醚酮）、不銹鋼和玻璃的組合或不銹鋼和聚合物的組合制成。使用不銹鋼有很多優(yōu)點(diǎn)，例如不銹鋼比玻璃更耐腐蝕、耐高壓、耐磨損，這也降低了使用成本。典型的 HPLC 色譜柱長(zhǎng) 3 到 25 厘米，直徑為 1 到 5 毫米，這與通常是直的 GC 色譜柱不同。填充色譜柱的顆粒的典型直徑在 3 到 5 µm 之間。當(dāng)柱內(nèi)積聚的顆粒直徑減小時(shí)，液相色譜柱的效率將提高。

峰或峰變寬會(huì)導(dǎo)致柱效降低。理想情況是尖峰得到解決。物質(zhì)在色譜柱中停留的時(shí)間越長(zhǎng)，峰就會(huì)越寬。

清潔 HPLC 色譜柱

我們都知道 HPLC 色譜柱的生命周期是有限的，即使經(jīng)過良好的清潔和儲(chǔ)存，它們也會(huì)到達(dá)生命周期的盡頭。但是，您可以采取某些措施來*大限度地延長(zhǎng)色譜柱的使用壽命。準(zhǔn)備好使用 HPLC 色譜柱后，您可以通過安裝在線過濾器、捕集柱和保護(hù)柱來幫助保持其完整性。這些將有助于防止污染物損壞您的 HPLC 色譜柱。

使用色譜柱后，始終建議在存儲(chǔ)前清潔色譜柱。清潔程序通常涉及使用*接近*后一個(gè)溶膠的溶劑系統(tǒng)進(jìn)行等度/梯度清洗

在色譜柱上排氣，但使用 HPLC 級(jí)水代替緩沖液。這將確保從列中刪除緩沖區(qū)組件。然后，您可以增加洗滌液中有機(jī)物的百分比，以進(jìn)一步去除任何疏水性雜質(zhì)。

反洗 HPLC 柱

如果您注意到峰形變差并伴有反壓增加，建議對(duì)色譜柱進(jìn)行反吹。在反吹之前，務(wù)必確保您的流動(dòng)相或柱內(nèi)溶劑可與您的清潔溶劑混溶，并且您的流速不超過色譜柱典型推薦流速的一半。有關(guān)詳細(xì)程序，請(qǐng)遵循我們的說明性色譜柱維護(hù)指南。您可以使用以下公式確定色譜柱體積：V = pr2L 其中 V 是以 ml 為單位的色譜柱體積，r 是以 cm 為單位的色譜柱半徑，L 是以 cm 為單位的色譜柱長(zhǎng)度。

要在使用后正確清潔反相 HPLC 色譜柱，首先，將流動(dòng)相替換為 95% HPLC 級(jí)水和 5% 乙腈，然后以大約 10 倍色譜柱體積的一半流速?zèng)_洗 HPLC 色譜柱。這將去除 HPLC 柱中剩余的任何緩沖液。然后，您可以根據(jù)需要逐漸移動(dòng)，將有機(jī)物含量增加到大約 95% 的乙腈和 5% 的水，反洗后，在使用前將色譜柱向前連接到常規(guī)流動(dòng)相。請(qǐng)注意，反洗色譜柱時(shí)，請(qǐng)斷開色譜柱與檢測(cè)器的連接。了解如何使用這些提示正確反洗 HPLC 色譜柱。

HPLC 柱存儲(chǔ)

使用后妥善存放色譜柱也很重要，尤其是長(zhǎng)時(shí)間存放時(shí)。重要的是不要在 HPLC 色譜柱仍含有任何緩沖液或離子對(duì)試劑時(shí)存放它。為確保這一點(diǎn)，通過 HPLC 柱沖洗五個(gè)柱體積，而無需流動(dòng)相緩沖液。對(duì)于帶有離子對(duì)試劑的色譜柱，可能需要延長(zhǎng)清洗時(shí)間以將它們從色譜柱中去除。洗滌后，將色譜柱倒置在乙腈/水 (65:35 v/v) 中，使用甲醇代替乙腈，正相柱使用 100% 己烷或 IPA，離子交換柱使用 100% 甲醇，乙腈/水（80 :20 v/v) 對(duì)于 HILIC 色譜柱。